تولید پروتئین نوترکیب vp2/vp3 ویروس نکروز عفونی پانکراس و بررسی نقش حفاظتی آن در قزل آلای رنگین کمان
پایان نامه
- وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهید چمران اهواز - دانشکده دامپزشکی
- نویسنده مریم دادار
- استاد راهنما حمید رجبی معماری رحیم پیغان مسعود رضا صیفی آباد شاپوری محدث قاسمی
- سال انتشار 1393
چکیده
ویروس نکروز عفونی پانکراس یا ipnv عامل بیماری مسری و واگیرداری به نام نکروز عفونی پانکراس در آزادماهیان پرورشی است که باعث تلفات بالا در آزادماهیان جوان می شود. این بیماری در ایران با سرعت پیشرونده ای به صورت یک بیماری بومی درآمده و باعث ضرر و زیان های اقتصادی به صنعت در حال رشد قزل آلا شده است. علاوه بر مرگ و میر بالا و ضرر و زیان اقتصادی ناشی از آن، ماهیان بهبود یافته از بیماری ipn در تمام طول زندگی حامل این ویروس بوده و ویروس را از راه انتقال عمودی و افقی و از طریق مدفوع و مواد تناسلی در زمان تکثیر به محیط دفع می کنند و این مسئله باعث ماندگاری ویروس در جمعیت ماهیان می شود. هدف در این تحقیق شناسایی خصوصیات کامل سویه بومی ویروس نکروز عفونی پانکراس، تعیین ژنوتیپ ویروس در ایران و تولید پروتئین نوترکیب ایمنی زا از سویه بومی و بررسی اثر محافظت کنندگی آن در قزل آلای رنگین کمان بود. به همین منظور با انجام آزمایش غربال گری به روش کشت سلولی،pcr و الایزا از بچه ماهیان مراکز فعال تکثیر و پرورش در استان مازندران، چهارمحال و بختیاری، کهگلویه و بویراحمد نمونه-برداری صورت گرفت. نتیجه غربال گری، ردیابی جدایه ویروس بومی ایران بود. به منظور تعیین ژنوتیپ ویروس ردیابی شده سه ناحیه مختلف vp2، vp3 وpolyprotein از جدایه های ویروس توسط پرایمرهای اختصاصی، تکثیر و سکانس گردید. کلیه توالی های سکانس شده به تعداد 6 ژن در بانک ژنی (ncbi) ثبت گردید. تعداد نوکلئوتید vp2 برابر باbp 1340، تعداد نوکلئوتید vp3برابر با bp 730 و تعداد نوکلئوتید پلی پروتئین قطعه a ویروس برابر با bp2927 مشخص گردید. با بررسی فیلوژنیک مشخص شد که ویروس ایران متعلق به ژنوگروپ 5، سروتیپ a2، سویه sp است و 99 درصد با ایزوله 1146 سویه اسپانیا شباهت دارد. پس از بررسی خصوصیات فیلوژنیک ویروس نکروز عفونی پانکراس بومی ایران، ژن های vp2 و vp3 از طریق rt-pcr تکثیر گردیدند و به صورت متصل به همدیگر در سویه های بیانی مناسب به صورت نوترکیب تولید شدند. پس از تخلیص پروتئین و ارزیابی آن با sds-page و وسترن بلات به ماهیان قزال آلا از طریق داخل صفاقی با 50 میکروگرم پروتئین تخلیص شده در طی یک دوره آزمایش 70 روزه مورد تزریق قرار گرفتند و قدرت محافظت کنندگی آن ها در ماهیان ایمن شده با یک چالش ویروسی با میزان 200 میکرولیتر از ویروس با تیتر 107 مورد ارزیابی قرار گرفت و مشخص گردید که ماهیان تزریق شده با پروتئین نوترکیب حاوی vp2-vp3 دارای سطح معنی دار بالاتری از نظر تولید آنتی بادی بوده(p<0.05) و درصد تلفات و تیتر ویروس در طحال پس از چالش با ویروس در این گروه به صورت معنی داری پایین تر از گروه های کنترل بود(p<0.05). نتایج حاصل از این مطالعه مشخص نمود که پروتئین نوترکیب vp2-vp3 می تواند گزینه مناسبی برای تولید واکسن نوترکیب علیه بیماری نکروز عفونی پانکراس باشد.
منابع مشابه
مطالعه ی پراکنش بیماری نکروز عفونی پانکراس در مزارع قزل آلای ایران به روش RT-PCR
در این مطالعه پراکنش جغرافیایی بیماری ویروس نکروز عفونی پانکراس به روش مولکولی (RT-PCR) در 18 استان کشور و در قالب بررسی موردی طی سالهای 1391-1390 انجام گرفته است. با توجه به بروز عفونتهای هم زمان بیماریهای نکروز عفونی پانکراس (IPN)، نکروز عفونی بافت خونساز (IHN) و سپتی سمی هموراژیک ویروسی (VHS) و نیز علائم بالینی مشابه ناشی از این بیماریها، همهی موارد نمونههای مورد مطالعه از بچه ما...
متن کاملجایگزینی منابع پروتئین گیاهی به جای پودر ماهی در تغذیه قزل آلای رنگین کمان (Oncorhynchus mykiss)
A 46-day feeding trial was conducted with rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) to examine the effects of partial substitution of plant protein sources with fish meal in diets. Three different sources of plant protein including soybean, sunflower and cottonseed meals were substituted by fish meal at four levels of 10, 20, 30 and 40 percentages. Each diet was assigned to triplicate groups of fish ...
متن کاملاثر پروتئین هیدرولیز شده ضایعات ماهی قزل آلای رنگین کمان (Oncorhyncus mykiss) روی محیط کشت باکتری
ضایعات حاصل ازکارخانجات عملآوری آبزیان، دارای پروتئین قابل بازیافت میباشند. در تحقیق حاضر تاثیر آنزیم های پاپائین (منشاء گیاهی)، تریپسین و پپسین (حیوانی)، آلکالاز و پروتامکس و فلاورزایم (میکروبی) و زمان تاثیرگذاری 30، 60، 90، 120، 150 و180 دقیقه بر میزان هیدرولیز ضایعات ماهی قزلآلای رنگینکمان مطالعه گردید. پروتئین بازیافت شده به عنوان منبع پپتون در محیط کشت دو باکتری لاکتوباسیلوس پلانتاروم،...
متن کاملجایگزینی منابع پروتئین گیاهی به جای پودر ماهی در تغذیه قزل آلای رنگین کمان (Oncorhynchus mykiss)
A 46-day feeding trial was conducted with rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) to examine the effects of partial substitution of plant protein sources with fish meal in diets. Three different sources of plant protein including soybean, sunflower and cottonseed meals were substituted by fish meal at four levels of 10, 20, 30 and 40 percentages. Each diet was assigned to triplicate groups of fish ...
متن کاملمطالعه ی پراکنش بیماری نکروز عفونی پانکراس در مزارع قزل آلای ایران به روش rt-pcr
در این مطالعه پراکنش جغرافیایی بیماری ویروس نکروز عفونی پانکراس به روش مولکولی (rt-pcr) در 18 استان کشور و در قالب بررسی موردی طی سالهای 1391-1390 انجام گرفته است. با توجه به بروز عفونتهای هم زمان بیماریهای نکروز عفونی پانکراس (ipn)، نکروز عفونی بافت خونساز (ihn) و سپتی سمی هموراژیک ویروسی (vhs) و نیز علائم بالینی مشابه ناشی از این بیماریها، همهی موارد نمونههای مورد مطالعه از بچه ماهیان...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده{@ msg_add @}
نوع سند: پایان نامه
وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهید چمران اهواز - دانشکده دامپزشکی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023